3.4.6中间精密度试验

由本实验室其他实验人员在不同时间和不同液相色谱仪上操作，参柏对同一批参柏洗剂（批号：20200501），洗剂按“3.3”项下方法分别制备6份供试液，质量按照“3.1.5”项下色谱条件测定含量，标准结果苦参碱和氧化苦参碱总和RSD为1.86%（n=12），提高表明所建含量测定方法中间精密度良好。研究

3.4.7加样回收率试验

取同一批次参柏洗剂（批号：20200501）9份，参柏每份5 mL，洗剂分别加入一定量的质量苦参碱和氧化苦参碱对照品，按照“3.3”项下方法制备供试品溶液，标准再按“3.1.5”项下色谱条件测定，提高计算苦参碱、研究氧化苦参碱回收率，参柏结果苦参碱平均回收率为99.27%，洗剂RSD为2.11%，质量氧化苦参碱平均回收率为103.07%，RSD为1.68%，表明所建立方法回收率良好，结果见表1、2。

3.4.8参柏洗剂样品含量测定

精密量取参柏洗剂离心后的上清液10 mL，置分液漏斗中，加入浓氨试液0.5 mL，摇匀，加三氯甲烷振摇提取4次，20 mL/次，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，转移至5 mL量瓶中，并加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

测定方法分别精密吸取苦参碱和氧化苦参碱对照品溶液10 μL与供试品溶液5 μL，进样，测定，结果见表3。

结果显示，不同批次参柏洗剂苦参碱和氧化苦参碱含量存在一定差异，推测与投料饮片质量参差不齐有关系。目前暂时测定了三批次参柏洗剂含量，日后将继续积累多批次样品含量测定数据，并根据测定结果确定合理的含量限度，以较好地控制参柏洗剂质量。

4讨论与小结

（1）本研究在参柏洗剂现行版标准基础上，增加了苦参碱、槐定碱、盐酸小檗碱对照品鉴别，使原有鉴别方法更有针对性；并通过试验摸索，使用苦参、黄柏鉴别项下供试品溶液，也可鉴别出臣药-地骨皮，增加了臣药薄层色谱鉴别方法。该制剂标准中3味中药的薄层色谱鉴别方法，均可采用同一份供试品溶液，操作简单方便，既可节约有机试剂，又可减少环境污染。

（2）研究过程中增加了参柏洗剂定量控制指标成分，在参柏洗剂苦参碱和氧化苦参碱含量测定研究过程中，根据生物碱类成分性质，加浓氨试液碱化样品，使生物碱更好地游离出来。提取过程中考察了样品是否离心再提取、加浓氨试液后是否静置一段时间再提取、以及三氯甲烷提取次数。结果显示：样品离心后再提取，可以减少乳化现象，且样品含量测定数据平行性较好；样品加浓氨试液摇匀，静置与否，苦参碱和氧化苦参碱含量测定结果基本一致，为节约时间，确定为样品加浓氨试液摇匀后，无需静置，可直接进行提取；为确保样品中苦参碱和氧化苦参碱可被充分提取，分别考察了提取3次、4次、5次的效果，结果显示，加三氯甲烷提取4次，苦参碱和氧化苦参碱可被提取完全，最终确定了本研究中含量测定供试品溶液的处理方法。

（3）本研究建立完善的参柏洗剂质量标准方法简单、重复性好，准确可靠，为参柏洗剂的质量标准修订提供依据，可用作该药的质量控制标准。

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